Cách chuẩn bị mẫu xét nghiệm với máy Realtime PCR

Realtime PCR hay còn gọi là Polymerase Chain Reaction, một kỹ thuật tiên tiến được sử dụng rộng rãi trong xét nghiệm sinh học phân tử để phát hiện và định lượng DNA hoặc RNA.

Để đảm bảo kết quả xét nghiệm PCR chính xác và đáng tin cậy, việc chuẩn bị mẫu xét nghiệm đóng vai trò vô cùng quan trọng.

1. Quy Trình Lấy Mẫu Xét Nghiệm PCR

Lấy mẫu đúng cách là bước đầu tiên và quan trọng nhất để đảm bảo chất lượng mẫu xét nghiệm. Tùy thuộc vào mục đích xét nghiệm chẩn đoán bệnh truyền nhiễm, phát hiện đột biến gen, hay nghiên cứu khoa học, loại mẫu có thể khác nhau như máu, dịch mũi họng, mô, hoặc nước bọt. Lintech JSC tổng hợp các bước cơ bản dưới đây:

1.1 Chuẩn bị dụng cụ lấy mẫu:

Sử dụng các dụng cụ vô trùng như ống nghiệm, tăm bông, hoặc ống hút chuyên dụng để tránh nhiễm bẩn mẫu.

1. 2 Lấy mẫu đúng kỹ thuật:

Đối với mẫu dịch mũi họng: Đưa tăm bông vào sâu trong khoang mũi hoặc họng, xoay nhẹ trong 5-10 giây để thu thập đủ tế bào.
Đối với mẫu máu: Sử dụng ống nghiệm chứa chất chống đông (EDTA) để đảm bảo DNA/RNA không bị phân hủy.
Đối với mẫu mô: Cắt mẫu mô trong điều kiện vô trùng và đặt ngay vào dung dịch bảo quản.

1.3 Đánh dấu mẫu:

Ghi rõ thông tin bệnh nhân, thời gian lấy mẫu, và loại mẫu để tránh nhầm lẫn.

Lưu ý: Nhân viên y tế cần đeo găng tay, khẩu trang và tuân thủ quy trình vô trùng để tránh lây nhiễm chéo.

2. Bảo Quản Mẫu Xét Nghiệm PCR

Qua nhiều năm bảo trì máy Realtime PCR, Lintech JSC đánh giá cao về việc bảo quản mẫu đúng cách giúp duy trì chất lượng DNA/RNA, tránh phân hủy hoặc nhiễm tạp chất, từ đó đảm bảo kết quả xét nghiệm PCR chính xác.

2.1 Nhiệt độ bảo quản:

Mẫu máu hoặc dịch cơ thể: Lưu trữ ở 2-8°C nếu xét nghiệm trong vòng 24 giờ. Nếu cần bảo quản lâu hơn, đông lạnh ở -20°C hoặc -80°C.

Mẫu mô: Đặt trong dung dịch bảo quản chuyên dụng (như RNAlater) và giữ ở -80°C.

2.2 Thời gian bảo quản:

Xử lý mẫu trong vòng 24-48 giờ để đảm bảo chất lượng. Nếu không thể xử lý ngay, đông lạnh mẫu ngay lập tức.

2.3 Tránh nhiễm bẩn:

Sử dụng ống nghiệm và dung dịch bảo quản vô trùng. Tránh để mẫu tiếp xúc với không khí quá lâu để giảm thiểu nguy cơ nhiễm khuẩn.

3. Những Lỗi Thông Thường Khi Chuẩn Bị Mẫu Xét Nghiệm Realtime PCR

Trong quá trình sửa chửa máy Realtime PCR, đội ngũ kỹ sư Lintech thường xuyên được khách hàng phản hồi các lỗi thường gặp, tuy nhiên các lỗi này không quá nghiêm trọng. Do đó Lintech JSC xin đưa ra một số lỗi và cách khắc phục những lỗi phổ biến có thể ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm Realtime PCR.

3.1 Nhiễm bẩn mẫu:

Nguyên nhân: Sử dụng dụng cụ không vô trùng hoặc lây nhiễm chéo trong quá trình lấy mẫu.

Khắc phục: Luôn sử dụng dụng cụ vô trùng và thực hiện lấy mẫu trong môi trường sạch.

3.2 Lượng mẫu không đủ:

Nguyên nhân: Lấy mẫu không đúng kỹ thuật, dẫn đến lượng DNA/RNA không đủ để khuếch đại.

Khắc phục: Đào tạo nhân viên y tế về kỹ thuật lấy mẫu chuẩn và kiểm tra lượng mẫu trước khi bảo quản.

3.3 Mẫu bị phân hủy:

Nguyên nhân: Bảo quản mẫu ở nhiệt độ không phù hợp hoặc để mẫu quá lâu trước khi xử lý.

Khắc phục: Tuân thủ nghiêm ngặt quy trình bảo quản và xử lý mẫu trong thời gian sớm nhất.

3.4 Nhầm lẫn mẫu:

Nguyên nhân: Ghi nhãn không rõ ràng hoặc không tuân thủ quy trình quản lý mẫu.

Khắc phục: Đánh dấu mẫu ngay sau khi lấy và sử dụng hệ thống quản lý mẫu tự động.

4. Mẹo Để Tối Ưu Hóa Kết Quả Xét Nghiệm PCR

Lintech JSC cố một số mẹo dễ dàng cho các kỹ thuật viên có thể áp dụng để tối ưu hóa kết quả xét nghiệm:

• Kiểm tra chất lượng mẫu: Sử dụng máy đo nồng độ DNA/RNA như Nanodrop để đảm bảo mẫu đạt yêu cầu trước khi chạy Realtime PCR.
• Sử dụng bộ kit chiết tách DNA/RNA chất lượng cao: Lựa chọn các bộ kit uy tín để đảm bảo tách chiết DNA/RNA hiệu quả, giảm thiểu tạp chất.
• Kiểm tra máy Realtime PCR: Đảm bảo máy được hiệu chuẩn và bảo trì thường xuyên để cho kết quả ổn định.
• Nhân Sự Được Đào Tạo Bài Bản: Đội ngũ thực hiện xét nghiệm cần được đào tạo bài bản về quy trình lấy mẫu, bảo quản, và vận hành máy.

Bạn có thể tìm hiểu thêm chi tiết việc tối ưu cho PCR tại đây: Hướng dẫn tối ưu hóa hiệu suất máy realtime PCR