Quy trình nhuộm gram tự động

Trang Thiết Bị và Hóa Chất Chuẩn Bị Trước Khi Nhuộm Gram

Thiết bị:

1. Máy nhuộm tự động DAGATRON AT100 MBSKN00.
   • Quy trình nhuộm Gram phân biệt vi khuẩn Gram dương màu tím đậm do lớp peptidoglycan dày và Gram âm màu hồng hoặc đỏ do màng phospholipid kép dễ tẩy màu. Gợi ý cho bạn Máy DAGATRON AT100-MBSKN00 giúp tự động hóa quy trình này, sử dụng hệ thống phun thuốc nhuộm để đảm bảo kết quả chính xác, đồng đều, giảm sai sót, ngăn nhiễm chéo, và tiết kiệm thời gian khoảng 15 đến 18 phút cho 10 đến 20 lam.
2. Kính hiển vi quang học và dầu soi.

Hóa chất và vật tư:

• Bộ thuốc nhuộm Gram chuyên dụng của Dagatron Crystal violet, iodine Gram/Lugol, acetone hoặc cồn ethyl 95%, Safranin 0.25% w/v hoặc Carbol fuchsin pha loãng 1:10.
• Giấy thấm dầu.

Ngoài ra bạn cần kiểm tra chuẩn bị mẫu nhuộm gram tại đây: Chuẩn bị mẫu nhuộm gram

Các Bước Nhuộm Tự Động

1. Cài đặt và kiểm tra máy:
   • Kiểm tra trạng thái máy bao gồm đầu phun, khay nhuộm, nguồn điện để đảm bảo hoạt động ổn định.
   • Đặt lam kính đã chuẩn bị sạch, cố định nhiệt vào khay nhuộm của DAGATRON AT100-MBSKN00 xử lý 10-20 lam tùy cấu hình.
   • Chọn chương trình nhuộm Gram trên bảng điều khiển vi xử lý.
2. Nhuộm chính với Crystal violet:
   • Máy tự động phun Crystal violet lên lam, giữ trong 60s, sau đó rửa sạch bằng hệ thống phun nước.
3. Gắn màu với iodine Gram/Lugol:
   • Máy phun dung dịch Lugol iodine Gram, giữ trong 1 phút, rồi rửa tự động.
4. Tẩy màu:
   • Máy phun acetone hoặc cồn ethyl 95% trong 5-10 giây, đảm bảo thời gian chính xác để tránh tẩy màu quá mức vi khuẩn Gram dương, sau đó rửa tự động.
5. Nhuộm đối kháng:
   • Máy phun Safranin pha loãng, giữ trong 45 giây, rồi rửa và sấy khô tự động.
6. Quan sát dưới kính hiển vi:
   • Lấy lam ra, lau mặt sau bằng giấy thấm, nhỏ một giọt dầu soi, và quan sát dưới vật kính dầu (100X).

Kết Quả Quan Sát

• Vi khuẩn Gram dương: Màu tím đậm Crystal violet
• Vi khuẩn Gram âm: Màu hồng hoặc đỏ Safranin
• Nấm men: Màu tím đậm, tương tự Gram dương
• Bạch cầu/tế bào biểu mô: Màu hồng nhạt.

Các Lỗi Tiềm Ẩn và Cách Khắc Phục

• Lỗi cài đặt chương trình: Sai chế độ nhuộm có thể dẫn đến thời gian hoặc lượng thuốc nhuộm không đúng. Khắc phục: Kiểm tra và chọn đúng chương trình nhuộm Gram trên bảng điều khiển.
• Tắc đầu phun: Do thuốc nhuộm khô hoặc cặn bẩn.
  Khắc phục: Vệ sinh đầu phun và khay nhuộm sau mỗi chu kỳ theo hướng dẫn của Dagatron.
• Lam kính không sạch: Gây cản trở hệ thống phun hoặc kết quả không đồng đều.
  Khắc phục: Kiểm tra lam trước khi đặt vào khay, đảm bảo không xước hoặc bẩn.
• Thuốc nhuộm hết hạn: Làm giảm hiệu quả nhuộm.
  Khắc phục: Kiểm tra hạn sử dụng và bảo quản thuốc nhuộm ở 15 đến 30°C, trong chai kín.

Lưu Ý Quan Trọng

• Bộ thuốc nhuộm Dagatron: Chỉ sử dụng bộ thuốc nhuộm Gram chuyên dụng của Dagatron để đảm bảo nồng độ và thời gian phun tối ưu. Bảo quản ở 15 đến 30°C, chai kín để tránh mất hoạt tính đặc biệt với Lugol.
• Thời gian tẩy màu: Máy kiểm soát chính xác 5 đến 10 giây, tránh tẩy quá lâu 30 giây như thủ công để đảm bảo vi khuẩn Gram dương giữ màu tím đậm.
• Ngăn nhiễm chéo: Hệ thống khay riêng biệt và làm sạch tự động đảm bảo không nhiễm chéo giữa các mẫu.
• Hiệu quả tự động hóa: Máy xử lý 10 đến 20 lam trong 15 đến 18 phút, tiết kiệm thời gian, thuốc nhuộm, và đảm bảo độ lặp lại cao so với phương pháp thủ công.