Cách chuẩn bị mẫu nhuộm gram tự động

Nguyên Lý Nhuộm Gram

Chuẩn bị mẫu là bước quan trọng để đảm bảo kết quả nhuộm Gram chính xác, đặc biệt nếu kỹ thuật viên sử dụng máy nhuộm gram tự động của hãng DAGATRON bởi Lintech JSC.

Việc chuẩn bị đúng cách giúp vi khuẩn bám chắc trên lam kính và bảo toàn cấu trúc thành tế bào, quyết định khả năng bắt màu Gram dương màu tím đậm nhờ lớp Peptidoglycan dày và acid teichoic hoặc Gram âm màu hồng/đỏ do màng phospholipid kép dễ bị tẩy màu.

Quy trình này sử dụng các thiết bị và vật tư chuyên dụng để tối ưu hóa cho hệ thống nhuộm tự động, ngăn nhiễm chéo và đảm bảo kết quả đồng đều.

Có thể bạn cần tìm hiểu về: Nhuộm gram là gì?

Trang Thiết Bị và Vật Tư Chuẩn Bị Khi Nhuộm Gram

Thiết bị:

• Tủ an toàn sinh học ATSH cấp 2: Đảm bảo xử lý mẫu bệnh phẩm an toàn, ngăn ngừa tiếp xúc với vi khuẩn gây bệnh.
• Máy ly tâm: Cô đặc mẫu dịch cơ thể như máu, dịch tiết để tăng mật độ vi khuẩn trước khi phết lên lam.
• Máy trộn hoặc lắc: Nhũ hóa mẫu vi khuẩn trong nước muối sinh lý, đảm bảo mẫu đồng nhất.
• Kính hiển vi quang học và dầu soi: Quan sát kết quả sau nhuộm.
• Đèn cồn hoặc đèn Bunsen: Cố định nhiệt mẫu trên lam kính.
• Ống vô trùng có nắp đậy và pipet Pasteur vô trùng: Xử lý mẫu bệnh phẩm hoặc mẫu nuôi cấy an toàn.

Vật tư:

• Lam kính sạch, không xước và lá kính mỏng: Đảm bảo tương thích với hệ thống phun thuốc nhuộm tự động và quan sát dưới kính hiển vi.
• Bút viết kính: Đánh dấu vùng phết mẫu trên lam.
• Que cấy vô trùng: Phết mẫu vi khuẩn lên lam.
• Giấy thấm dầu: Làm sạch lam sau nhuộm để quan sát rõ ràng.
• Bộ thuốc nhuộm Gram chuyên dụng của Dagatron: Bao gồm Crystal violet, iodine Gram, acetone/cồn ethyl 95%, Safranin hoặc Carbol fuchsin pha loãng, được tối ưu cho hệ thống phun tự động.

Quy Trình Chuẩn Bị Mẫu Nhuộm Gram

1. Chuẩn bị môi trường làm việc: Thực hiện trong tủ an toàn sinh học cấp 2, sử dụng găng tay, khẩu trang và thiết bị bảo hộ cá nhân (PPE) để đảm bảo an toàn sinh học.
2. Đánh dấu lam kính: Dùng bút viết kính khoanh vùng hình oval trên lam kính sạch để xác định vị trí phết mẫu.
3. Chuyển mẫu lên lam:
   • Đối với mẫu bệnh phẩm (dịch cơ thể), dùng pipet Pasteur vô trùng nhỏ một giọt mẫu lên vùng đã khoanh. Nếu cần, sử dụng máy ly tâm để cô đặc mẫu.
   • Đối với mẫu vi khuẩn từ môi trường nuôi cấy, nhỏ một giọt nước muối sinh lý hoặc nước cất lên lam, dùng que cấy vô trùng lấy khuẩn lạc và nhũ hóa nhẹ nhàng (có thể dùng máy trộn/lắc để đảm bảo mẫu đồng nhất).
4. Làm khô mẫu: Để lam khô tự nhiên trong không khí, tránh dùng nhiệt trực tiếp để không làm hỏng cấu trúc tế bào.
5. Cố định mẫu: Hơ lam qua ngọn lửa đèn cồn hoặc đèn Bunsen 3-4 lần, mặt mẫu hướng lên, để cố định vi khuẩn. Tránh làm nóng quá mức vì có thể phá hủy lớp peptidoglycan (Gram dương) hoặc màng phospholipid (Gram âm), dẫn đến kết quả nhuộm sai.
6. Kiểm tra và đặt lam vào máy: Đảm bảo lam kính sạch, không có vết bẩn hoặc mẫu dư thừa. Đặt lam vào khay nhuộm của máy DAGATRON AT100-MBSKN00, sắp xếp riêng biệt để ngăn nhiễm chéo, sẵn sàng cho quy trình nhuộm tự động.

Lưu Ý Quan Trọng Trong Quá Trình Chuẩn Bị Mẫu Nhuộm Gram

• Bảo toàn cấu trúc tế bào: Cố định nhiệt đúng cách để duy trì lớp peptidoglycan ở vi khuẩn Gram dương và màng phospholipid ở vi khuẩn Gram âm, đảm bảo khả năng bắt màu chính xác khi máy phun thuốc nhuộm.
• Chất lượng lam kính: Lam phải sạch, không xước để tương thích với hệ thống phun tự động của DAGATRON AT100-MBSKN00.
• Bộ thuốc nhuộm Dagatron: Chỉ sử dụng bộ thuốc nhuộm chuyên dụng để đảm bảo nồng độ và thời gian phun thuốc tối ưu. Bảo quản thuốc nhuộm trong chai kín, ở nhiệt độ 15-30°C để tránh mất hoạt tính (đặc biệt với iodine).
• An toàn sinh học: Thực hiện trong ATSH cấp 2 để tránh nhiễm chéo và đảm bảo an toàn khi xử lý mẫu vi khuẩn gây bệnh.