English
Thiết bị phòng thí nghiệm
Multiplex PCR Phát Hiện Nhiều Mục Tiêu Trong 1 Phản Ứng
Multiplex PCR Là Gì?
Multiplex PCR (Polymerase Chain Reaction đa mục tiêu) là một biến thể của kỹ thuật PCR, sử dụng nhiều bộ mồi (primers) và đầu dò (probes) đặc hiệu để khuếch đại và phát hiện đồng thời nhiều trình tự nucleic acid trong một ống phản ứng. Điều này giúp tiết kiệm thời gian, mẫu xét nghiệm, và chi phí so với PCR thông thường, vốn chỉ phát hiện một mục tiêu mỗi lần.
Multiplex PCR là một kỹ thuật xét nghiệm phân tử tiên tiến, cho phép phát hiện đồng thời nhiều mục tiêu nucleic acid DNA hoặc RNA trong một phản ứng duy nhất. Khác với PCR thông thường, Multiplex PCR mang lại hiệu quả vượt trội trong chẩn đoán các bệnh truyền nhiễm, đặc biệt là các bệnh đường hô hấp như COVID-19, cúm A, cúm B, và virus hợp bào hô hấp RSV. Với sự hỗ trợ của hệ thống tự động Alinity m từ Abbott Molecular, Multiplex PCR đã trở thành công cụ quan trọng trong các phòng xét nghiệm hiện đại.
Tìm hiểu thêm: Máy PCR Chẩn đoán nhanh trong sinh học phân tử
Multiplex PCR Khác Gì Với Kỹ Thuật PCR Thường?
Số lượng mục tiêu:
- PCR thông thường:
Chỉ khuếch đại một trình tự nucleic acid ví dụ: một gen của SARS-CoV-2 trong một phản ứng. - Multiplex PCR:
Phát hiện nhiều mục tiêu cùng lúc ví dụ: SARS-CoV-2, Influenza A, Influenza B, và RSV trong Alinity m Resp-4-Plex.
Hiệu quả:
- PCR thông thường:
Cần nhiều phản ứng riêng lẻ, tốn mẫu và thời gian. - Multiplex PCR:
Chỉ cần một phản ứng, tiết kiệm mẫu và trả kết quả nhanh hơn (kết quả đầu tiên trong <115 phút với Alinity m
Độ phức tạp:
- CR thông thường:
Thiết kế đơn giản, chỉ cần một cặp mồi. - Multiplex PCR:
Phức tạp hơn, yêu cầu tối ưu hóa nhiều cặp mồi hay đầu dò để tránh cạnh tranh hoặc nhiễu.
Ứng dụng:
- PCR thông thường:
Phù hợp cho xét nghiệm một tác nhân cụ thể. - Multiplex PCR:
Lý tưởng cho chẩn đoán phân biệt các bệnh có triệu chứng tương tự, như các bệnh hô hấp.
Tìm Hiểu Về Nguyên Lý Hoạt Động của Multiplex PCR
- Chuẩn bị mẫu:
Nucleic acid RNA hoặc DNA được tách chiết từ mẫu bệnh phẩm (như tăm mũi họng hoặc tăm mũi trước) bằng công nghệ microparticle từ tính. - Khuếch đại:
Nhiều cặp mồi và đầu dò đặc hiệu, gắn với các fluorophore khác nhau, khuếch đại các mục tiêu bằng Real-time RT-PCR. - Phát hiện:
Tín hiệu huỳnh quang từ đầu dò giúp phân biệt từng mục tiêu SARS-CoV-2, Influenza A, Influenza B, RSV. - Nội kiểm (IC):
Trình tự RNA từ gen hydroxypyruvate reductase được thêm để đảm bảo quy trình khuếch đại chính xác.
Lợi Ích của Kỹ Thuật Multiplex PCR
- Hiệu quả cao:
Phát hiện nhiều tác nhân gây bệnh trong một lần xét nghiệm, giảm thời gian trả kết quả. - Tiết kiệm chi phí:
Sử dụng ít thuốc thử và mẫu hơn so với PCR thông thường. - Độ nhạy và đặc hiệu vượt trội:
Đảm bảo phát hiện chính xác ngay cả ở nồng độ virus thấp LoD từ 0.005 TCID50/mL cho SARS-CoV-2. - Tự động hóa:
Hệ thống Alinity m tự động hóa toàn bộ quy trình, giảm nguy cơ nhiễm bẩn và sai sót.
Ứng Dụng Multiplex PCR với Alinity m Xét nghiệm PCR tự động
Xét nghiệm Alinity m là một ví dụ điển hình của Multiplex PCR, được thiết kế để phát hiện đồng thời SARS-CoV-2, Influenza A, Influenza B, và RSV trong mẫu tăm mũi trước hoặc mũi họng. Dưới đây là các đặc điểm nổi bật:
Phát Hiện Đồng Thời 4 Virus
Mục tiêu:
- SARS-CoV-2: Gen RdRp và N.
- Influenza A: Gen Matrix.
- Influenza B: Gen Nonstructural 1.
- RSV: Gen Matrix.
Nội kiểm IC:
Sử dụng trình tự RNA từ gen hydroxypyruvate reductase, đảm bảo độ tin cậy.
Fluorophore riêng biệt:
Mỗi virus trừ SARS-CoV-2 được gắn fluorophore khác nhau, cho phép phân biệt chính xác trong một phản ứng.
Hiệu Suất Vượt Trội
- Giới hạn phát hiện (LoD):
- SARS-CoV-2: 0.005 TCID50/mL (30 GE/mL).
- Influenza A: 0.002–0.015 TCID50/mL.
- Influenza B: 0.020–0.050 TCID50/mL.
- RSV: 0.100–0.300 TCID50/mL.
- Thời gian trả kết quả:
- Kết quả đầu tiên trong <115 phút, xử lý 300 mẫu trong ~8 giờ.
- Độ chính xác lâm sàng:
- PPA (Positive Percent Agreement): 100% cho cả 4 virus so với xét nghiệm đối chứng.
- NPA (Negative Percent Agreement): 96.6% cho SARS-CoV-2, gần 100% cho Influenza A, B, và RSV.
Tính Năng Tự Động Hóa của Alinity m
- Công nghệ ReadiFlex: Chạy nhiều xét nghiệm ngẫu nhiên song song, hỗ trợ tối đa 20 xét nghiệm cùng lúc.
- Tách chiết RNA: Công nghệ microparticle từ tính tinh sạch RNA, loại bỏ chất ức chế.
- Ngăn nhiễm bẩn: Ống phản ứng kín và đầu tip chống aerosol giảm nguy cơ nhiễm bẩn chéo.
- Kiểm soát chất lượng: Bao gồm Negative Control và Positive Control chạy mỗi 24 giờ để đảm bảo hiệu suất.
Ứng Dụng Lâm Sàng
- Chẩn đoán phân biệt: Hỗ trợ bác sĩ phân biệt các bệnh hô hấp do SARS-CoV-2, cúm A, cúm B, hoặc RSV, đặc biệt khi triệu chứng tương tự.
- Phù hợp cho phòng xét nghiệm CLIA: Chỉ sử dụng bởi các phòng xét nghiệm được chứng nhận cho xét nghiệm phức tạp vừa hoặc cao.
- Báo cáo bắt buộc: Kết quả SARS-CoV-2 phải báo cáo cho cơ quan y tế công cộng theo quy định FDA.
Những Lưu Ý Quan Trọng Khi Sử Dụng Multiplex PCR
- Can thiệp: Nồng độ cao của Pneumocystis jirovecii (PJP) có thể gây âm tính giả, nhưng pha loãng 1:50 loại bỏ vấn đề.
- Vaccine sống: Tiếp xúc gần đây với FluMist có thể gây dương tính giả cho Influenza A/B hoặc âm tính giả cho RSV.
- Đột biến virus: Đột biến trong vùng mục tiêu có thể ảnh hưởng đến khả năng phát hiện.
- Bảo quản mẫu: Mẫu phải được lưu trữ ở 5°C ± 3°C tối đa 80 giờ hoặc -70°C tối đa 7 ngày tối đa 2 chu kỳ đông lạnh/tan băng.
Tại Sao Nên Chọn Multiplex PCR với hệ thống Alinity m được phân phối bởi Lintech JSC?
Tốc độ và hiệu quả: Rút ngắn thời gian chẩn đoán so với PCR thông thường, phù hợp với các tình huống khẩn cấp như đại dịch Covid 19 vừa qua.
Độ chính xác cao: Được cả FDA cấp phép sử dụng khẩn cấp chứng chỉ EUA và tuân thủ các tiêu chuẩn nghiêm ngặt.
Dễ sử dụng: Hệ thống Alinity m tự động hóa giúp giảm lỗi phát sinh từ người nhưng vẫn tăng tính nhất quán.
Multiplex PCR là một bước tiến lớn trong chẩn đoán phân tử, vượt trội hơn PCR thông thường nhờ khả năng phát hiện đồng thời nhiều tác nhân gây bệnh trong một lần xét nghiệm. Với độ nhạy cao, quy trình tự động hóa, và thời gian trả kết quả nhanh, Multiplex PCR trên Alinity m là lựa chọn lý tưởng cho các phòng xét nghiệm hiện đại.
