Accuris™ Enzyme Taq DNA Polymerase

Giới thiệu về Accuris Taq DNA Polymerase

Accuris Taq DNA Polymerase hay còn gọi tắt là Accuris Taq, đây là một loại enzyme polymerase dùng cho phản ứng PCR thông thường Đây là enzyme Taq polymerase đã được cải tiến của hãng Accuris thuộc Benchmark Scientific, dành cho các ứng dụng PCR cơ bản, nhanh và chuẩn xác trong phòng thí nghiệm phân tử sinh học.

Ưu Điểm của Accuris Taq

Accuris Taq mang lại kết quả vượt trội cho mọi ứng dụng PCR thông thường. Enzyme này được cải tiến đặc biệt để tăng khả năng bám DNA mẫu, có độ tan cao hơn và bắt mẫu DNA chắc hơn hẳn nên luôn cho hiệu suất ổn định và vượt trội.

Accuris Taq Polymerase có hoạt tính nuclease 5′ đến 3′ tạo đầu A cho TA cloning nhưng không có hoạt tính proofreading 3′ đến 5′. Enzyme hoạt động cực tốt với mọi loại DNA mẫu, kể cả các đoạn giàu GC.

Sản phẩm được cung cấp kèm buffer 5X chứa sẵn MgCl₂ và hỗn hợp enhancer độc quyền chưa có dNTPs. Để tiện lợi nhất, Accuris Taq còn có dạng 2X Master Mix sẵn dùng, chỉ cần thêm primer và DNA mẫu là chạy được ngay.

Phiên bản “Red Dye” Master Mix đã tích hợp sẵn thuốc nhuộm đỏ và glycerol đậm đặc, nên sau khi PCR xong có thể nhỏ trực tiếp lên gel agarose mà không cần thêm loading dye. Màu đỏ giúp dễ quan sát khi pipet, đồng thời độ nặng cao hơn đảm bảo mẫu luôn chìm gọn xuống đáy giếng gel.

Đặc điểm nổi bật

• Không có hoạt tính proofreading (3′ đến 5′ exonuclease), do đó sản phẩm PCR có đầu 3′-A và dùng trực tiếp cho TA cloning.
• Độ bám mẫu DNA chắc hơn hẳn Taq thông thường, cho năng suất cao hơn 20-30%, đặc biệt hiệu quả với mẫu GC-rich tới 75% GC.
• Độ processivity và tốc độ tổng hợp cao, dễ dàng khuếch đại đoạn dài 5-10 kb (khuyến cáo tối đa 8 kb).
• Chất đệm độc quyền có enhancer đặc biệt, ít bị ức chế bởi tạp chất nên chạy tốt mẫu thô như máu, mô thực vật, đất, hoặc colony trực tiếp.
• Dạng Master Mix đã chứa sẵn dNTPs và MgCl₂ nồng độ tối ưu 1.5-2 mM, chỉ cần thêm primer và DNA mẫu là chạy được ngay.
• Phiên bản Red Dye tích hợp sẵn thuốc nhuộm đỏ và glycerol đậm đặc, sau PCR nhỏ trực tiếp lên gel mà không cần thêm loading dye.

Thông số kỹ thuật:

Độ processivity khả năng tổng hợp liên tục:

Cao hơn so với Taq polymerase thông thường, giúp khuếch đại các đoạn DNA dài hơn (lên đến 5-10 kb tùy điều kiện), với tốc độ tổng hợp khoảng 50-100 nucleotides/giây ở 72°C.

Điều kiện hoạt động tối ưu:

• Nhiệt độ ủ: từ 50 đến 65°C tùy primer.
• Số chu kỳ PCR: 25 tới 35 chu kỳ.
• Lượng enzyme khuyến nghị: 0.5 tới 2.5 units/50 µl phản ứng tùy kích thước mẫu.
• Hoạt động tốt ở nồng độ ion đa dạng, nhờ chất đệm độc quyền chứa MgCl₂ 1.5-2 mM và các chất tăng cường giúp giảm ức chế từ tạp chất.

Lưu trữ và ổn định:

Bảo quản ở âm 20°C, ổn định đến 2 năm, có thể đông lạnh lặp lại 50 lần mà không mất hoạt tính.

Tương thích:

Hoạt động với các máy PCR tiêu chuẩn, và được kiểm tra không có ô nhiễm nuclease.

Phân loại Accuris Taq DNA Polymerase

Mã hàng	Tên sản phẩm đầy đủ	Quy cách
PR1000-500	Accuris Taq DNA Polymerase	500 units (nồng độ 5 u/µl)
PR1000-1000	Accuris Taq DNA Polymerase	1000 units (nồng độ 5 u/µl)
PR1000-6000	Accuris Taq DNA Polymerase	6000 units (nồng độ 5 u/µl)
PR1001-200	Accuris 2x Taq Master Mix (loại trong suốt)	200 phản ứng × 50 µl (tổng 10 ml)
PR1001-1000	Accuris 2x Taq Master Mix (loại trong suốt)	1000 phản ứng × 50 µl (tổng 50 ml)
PR1001-R-200	Accuris 2x Taq Red Dye Master Mix (có thuốc nhuộm đỏ)	200 phản ứng × 50 µl (tổng 10 ml)
PR1001-R-1000	Accuris 2x Taq Red Dye Master Mix (có thuốc nhuộm đỏ)	1000 phản ứng × 50 µl (tổng 50 ml)

Tham khảo cách sử dụng Accuris Taq và protocol

Chuẩn bị phản ứng với 2X Master Mix

Trộn 25 µl Master Mix + 1 µl primer forward 10 µM + 1 µl primer reverse 10 µM + 1-100 ng DNA template + nước đến 50 µl. Không cần thêm dNTPs hoặc MgCl₂.

Chương trình PCR tiêu chuẩn

• Initial denaturation: 95°C, 2 đến 5 phút.
• Denaturation: 95°C, 30 giây.
• Annealing: 50-65°C, 30 giây.
• Extension: 72°C, 30 giây/kb.
• Final extension: 72°C, 5-10 phút.

Mẹo thực tế:

Với mẫu GC-rich, tăng thời gian denaturation lên 1 phút; với colony PCR, sử dụng trực tiếp 1-10 colony mà không cần chiết DNA. Sản phẩm PCR có thể dùng trực tiếp cho TA cloning nhờ đầu 3′-A overhang từ hoạt tính polymerase.

Công cụ hỗ trợ:

Accuris cung cấp “PCR Selector Tool” trực tuyến để chọn loại polymerase phù hợp dựa trên ứng dụng cụ thể.

Ứng dụng

• PCR thông thường & kiểm tra insert Kiểm tra plasmid sau cloning, kiểm tra insert trong vector, kiểm tra kết quả ligation. Band sạch, dày, rất ít non-specific.
• Genotyping Phân tích SNP, kiểm tra dòng chuột biến đổi gen, phân biệt dòng cây trồng, cá giống… hầu hết các lab di truyền ở Việt Nam đều dùng Accuris Taq Red cho bước này.
• Colony PCR Lấy khuẩn lạc trực tiếp bằng tăm hoặc đầu tip, bỏ vào ống PCR có Master Mix đỏ từ 90 đến 95% ra band đẹp mà không cần chiết DNA. Tiết kiệm thời gian cực lớn.
• PCR từ mẫu thô
  • Máu tươi hoặc máu khô trên giấy FTA
  • Mô lá cây, rễ cây, hạt
  • Đất, phân, nước ao nuôi tôm/cá
  • Mẫu thức ăn chăn nuôi Chỉ cần xử lý sơ đun sôi hoặc ly tâm nhanh là chạy được ngay.
• Khuếch đại đoạn GC-rich và AT-rich Đoạn có 70 đến 75% GC hoặc đoạn AT-rich dài vẫn ra band tốt, ít phải tối ưu DMSO hay betaine.
• Dạy học sinh viên & thực hành PCR cơ bản
  • Đại học Bách Khoa, ĐH Khoa học Tự nhiên, ĐH Y Dược, ĐH Nông Lâm… đều chọn Accuris Taq Red làm vật liệu thực hành chính vì giá rẻ, dễ dùng, band đẹp, sinh viên mới làm cũng thành công ngay.
• Kiểm tra nhanh trong nuôi cấy mô thực vật và chẩn đoán phân tử Nhiều công ty nuôi cấy mô lan, công ty giống cây trồng và trung tâm xét nghiệm dùng Accuris Taq Red để kiểm tra nhiễm khuẩn, kiểm tra dòng sạch rất nhanh.
• Multiplex PCR đơn giản 2-4 cặp primer Vẫn cho kết quả ổn định, ít band giả.