Accuris One Step RT PCR Kit 1 Bước

Mô tả sản phẩm

Bộ Accuris One-Step RT-PCR Kit được thiết kế để thực hiện tổng hợp cDNA và phản ứng PCR tiếp theo trong cùng một ống duy nhất, phục vụ phân tích điểm cuối endpoint analysis.

Bộ kit bao gồm:

• Enzyme Reverse Transcriptase chịu nhiệt cao hoạt động tối ưu 45 đến 55°C, có nguồn gốc từ MMLV
• Chất ức chế RNase mạnh mẽ
• Accuris Hot Start Taq Polymerase

Nhờ đó cho phép thực hiện RT-PCR một bước cực kỳ nhạy, có thể phát hiện từ lượng mẫu khởi đầu chỉ 1 pg total RNA.

Hệ đệm phản ứng được tối ưu hóa đặc biệt giúp sao chép ngược và khuếch tự PCR hiệu quả ngay cả với các trình tự khó có cấu trúc thứ cấp phức tạp vùng giàu GC-rich.

Accuris One-Step RT-PCR Kit là lựa chọn lý tưởng để:

• Xác định sự hiện diện hoặc vắng mặt của mẫu RNA
• Định tính mức độ biểu hiện gen thông qua phân tích mức phiên mã RNA
• Tổng hợp cDNA hai sợi đầy đủ chiều dài phục vụ phân tích biểu hiện gen sau này

Ưu điểm nổi bật

Độ nhạy cao: Phát hiện được các bản phiên mã có số lượng bản sao thấp • Mạnh mẽ: Vượt qua cấu trúc thứ cấp khó trong các đích giàu GC • Thuận tiện: Tổng hợp cDNA đầy đủ chiều dài và PCR trong cùng một ống

Bảo quản

• Ngay khi nhận hàng, bảo quản ở âm 20°C
• Tránh đông-rã lặp lại nhiều lần
• Khi bảo quản đúng cách, sản phẩm giữ hoạt tính trong 12 tháng kể từ ngày nhận
• Có thể bảo quản ở 4°C trong tối đa 1 tháng

Giới hạn sử dụng

Chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu. Không dùng cho chẩn đoán hoặc điều trị trên người.

Kiểm soát chất lượng

Tất cả enzyme và thuốc thử của Accuris đều được kiểm tra hoạt tính, độ lặp lại, hiệu suất, khả năng kích hoạt nhiệt, độ nhạy và không nhiễm nuclease theo các điều kiện assay tiêu chuẩn. Sản phẩm được sản xuất theo hệ thống quản lý chất lượng toàn diện tuân thủ tiêu chuẩn ISO 9001:2008.

Thành phần đóng gói & mã đặt hàng

Hướng dẫn thiết lập phản ứng (50 µl)

Quy trình nhiệt Protocol khuyến cáo

1. Sao chép ngược ở 45°C trong 10 phút dùng 55°C nếu RNA có cấu trúc thứ cấp cao hoặc giàu GC, và tăng thời gian lên 20 phút nếu amplicon >1 kb.
2. Kích hoạt polymerase & biến tính ban đầu: 95°C trong 2 phút
3. Chu kỳ PCR đạt từ 30 đến 40 chu kỳ:
   • 95°C đến 10 giây (biến tính)
   • 60 đến 67°C đến 10 giây (nhiệt độ annealing do người dùng tối ưu)
   • 72°C đến 30 đến 60 giây; khuyến cáo 15 giây/kb cho sản phẩm ≤3 kb

Hướng dẫn chung

• 2X One-Step Mix đã chứa: HS Taq Polymerase, 2 mM dNTPs, 6 mM MgCl₂ và các chất tăng cường PCR vì vậy không cần bổ sung thêm chất tăng cường.
• Primer: Nên thiết kế Tm ≈ 60°C (theo Primer3 mặc định), nồng độ cuối 0.2 đến 0.6 µM.
• Annealing: Có thể chạy gradient để tìm nhiệt độ tối ưu; bắt đầu từ 60°C, tăng dần 2°C nếu có sản phẩm không đặc hiệu.